1.动物实验
1.1 原理
用低铁饲料喂饲动物可形成实验性缺铁性贫血模型，再给予受试样品，观察其对血液细胞学、血液生化学等指标的影响，可判定该受试样品对改善动物营养性贫血的作用。
1.2 实验动物
健康初断乳大鼠，正式贫血恢复实验时单一性别，每组大鼠8-12只。
1.3 低铁饲料
低铁饲料配方可任选以下配方之一：
配方一： 成 分 %
葡萄糖（结晶水） 49.38 氯 化 钾 0.50
EDTA处理酪蛋白 20.00 混合微量元素① 0.27
脱脐黄玉米粉 15.00 氯 化 胆 碱 0.15
明 胶 5.00 混合维生素② 0.10
玉 米 油 5.00 DL—蛋氨酸 0.10
磷酸二氢钠 2.00
碳 酸 钙 2.00
①混合微量元素(g%): MgSO4·H2O 73.816g，ZnSO4·7H20 19.657g，MnSO4·H2O 5.733g，CuSO4·5H2O 0.7315g，KIO3 0.0625g。
②混合维生素(g%)：维生素A(50万IU/g) 1.00g, 维生素D3(20万IU/g) 0.75g, a-醋酸生育酚(含25%VE的明胶) 12.50g, 维生素K 0.04g, 盐酸硫胺素0.30g, 核黄素0.30g, 维生素B6 0.30g, 泛酪钙0.60g, 尼克酸3.00g, 叶酸0.10g, 维生素B12(含0.1%B12的明胶) 2.00g, 蔗糖 79.11g。
配方二： 成 分 %
EDTA处理酪蛋白 15 AIN-76M混合维生素 1.0
大米粉（梗稻） 70 氯化胆碱 0.2
玉米油 5.0 明 胶 5.0
AIN-76M混合矿物盐 3.5 DL-蛋氨酸 0.3
AIN-76M混合矿物盐配方：
矿物质 添加量 AIN-76M按3.5%添加
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Ca mg 516
P mg 399
Na mg 102
K mg 316
Cl mg 182
Mg mg 51
Mn mg 5.6
Cu mg 0.57
I mg 0.02
Cr mg 0.15
Zn mg 4.0
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AIN-76M混合维生素配方：
维生素 添加量 AIN-76M按1.0%添加
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醋酸视黄醇 IU 400
胆钙化醇 IU 100
DL-α-醋酸生育酚 mg 5.0
盐酸硫胺素 mg 0.6
核黄素 mg 0.6
盐酸吡哆醇 mg 0.7
氰钴胺素 ug 0.001
维生素K mg 0.005
D-生物素 mg 0.02
叶酸 mg 0.2
泛酸钙 mg 1.6
尼克酸 mg 3.0
酒石酸胆碱 g 0.2
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配方三： ％
EDTA处理酪蛋白①② 15
大米粉（梗稻） 70
玉米油 5.0
AIN－76M混合盐③ 3.5
AIN－76M混合维生素④ 1.2
明胶 5.0
DL－蛋氨酸 0.3
①可用鸡蛋白粉代替EDTA处理酪蛋白，同时不用添加DL－蛋氨酸，因为市售蛋清粉中的铁含量（Fe7.7-8.4mg/kg）比多次用EDTA处理酪蛋白含铁还低（Fe16.5mg/kg，未处理酪蛋白含铁131.1mg/kg）。用上述配方，每公斤饲料含铁量约8～15mg。
②EDTA处理酪蛋白的制备：用去离子水配制1％的EDTA-Na2水溶液；将酪蛋白过20目筛，用1％EDTA-Na2溶液浸泡过夜；捞出酪蛋白放入布袋中，置洗衣机中脱水；反复用去离子水冲洗，直至完全洗净酪蛋白中的EDTA-Na2；；脱水后，放入烤箱，80OC烘干，研磨成粉，过20 目筛后备用。
③AIN－76M混合盐配方（g/kg）：Calcium phosphate Dibasic,500.00;Sodium chloride, 74.00;Potassium citrate Monohydrate, 220.00;Potassium sμLfate, 52.00;Magnesium oxide ,24.00;Mangamese carbonate (43-48%Mn),3.50;Zinc carbonate (70% ZnO),1.60;Cupric carbonate (53-55%),0.30;Potassium iodate,0.01;Sodium selemite,0.01;Chromium potassium sμLfate,0.55;添加葡萄糖（原配方中为蔗糖）118.00，研磨成粉混合均匀后过20目筛。
④AIN－76M混合维生素配方（g/kg）:Retiny acetate or retinyl palmitate (Vitamin A ), pre-mix 250.000IU/g,1.6;Cholecalciferol(vitamin D3, 400.000IU/g),0.25;dl-α-tocopheryl acetate (250IU/g), 20.0; Thiamine·HCL,0.6;Riboflavin,0.6;Pyridoxine·HCL,0.7;Cyanocobalamin(vitamin B12),0.001;Menadione,0.005;D-biotin,0.02;Falic acid, 0.2;D-Calcium pantothenate,1.6;Nicotinic acid,3.0;添加葡萄糖（原配方中为蔗糖）972.9g,研磨成粉混合均匀后过20目筛，然后添加Choline bitartrate, 200.0充分混合，过筛。
配方四： %
葡萄糖（结晶水） 49.38
EDTA处理酪蛋白 20.00
脱脐黄玉米粉 15.00
明胶 5.00
玉米油 5.00
磷酸二氢钠 2.00
碳酸钙 2.00
氯化钾 0.50
氯化钠 0.50
混合微量元素① 0.27
氯化胆碱 0.15
混合维生素② 0.10
DL－蛋氨酸 0.10
①混合微量元素（g%）:MgSO4·H2O73.816g,ZnSO4·7H2O19.657g,MnSO4·H2O5.733g,CuSO4·5H2O0.7315g,KIO30.0625g。
②混合维生素（g%）：维生素A（50万IU/g）1.00g，维生素D3（20万IU/g）0.75gα－醋酸生育酚（含维生素E的明胶）12.5g，维生素K 0.04g，盐酸硫胺素0.3g，核黄素0.3g，维生素B6 0.3g，泛酸钙0.6g，盐酸3.00g，叶酸0.10g，维生素B12(含0.1%维生素B12的明胶)2.00g,葡萄糖79.11g.
1.4剂量分组及受试样品给予时间
实验设三个剂量组和一个低铁对照组，以人体推荐量的5倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组（硫酸亚铁或乳酸亚铁，剂量为2ppm或2mg/kg体重, 以Fe元素计）。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。
1.5 实验步骤
1.5.1 建立缺铁性贫血大鼠模型
选用健康断乳大鼠在实验环境下适应3～5天后饲予低铁饲料及去离子水（或双蒸水），采用不锈钢笼及食罐，实验过程中避免铁污染。自第3周开始每周选取部分大鼠采尾血测Hb，直至多数动物Hb低于100g/L以下时，测定全部大鼠的体重及Hb。
1.5.2 恢复实验
选取Hb<100g/L的大鼠作为实验动物，根据贫血大鼠Hb水平和体重将其随机分为低铁对照组和三个实验组，各组均继续饲予低铁饲料，低铁对照组给予相应溶剂，实验组分别给予不同剂量的受试样品，受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天，测定体重及各项血液学指标。
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