1 范围
本方法规定了繁殖试验的基本技术要求。
本方法适用于评价保健食品对受试动物生殖机能的影响。
 
    2 原理
凡受试物能引起生殖机能障碍，干扰配子的形成或使生殖细胞受损，其结果除可影响受精卵或孕卵的着床而导致不孕外，尚可影响胚胎的发生及胎仔的发育，如胚胎死亡导致自然流产、胎仔发育迟缓以及胎仔畸形。如果对母体造成不良影响会出现妊娠、分娩和乳汁分泌的异常，亦可出现胎仔出生后发育异常。
 
    3 实验动物
选用5～9周龄大鼠，试验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的±20％ 。购买后至少应适应3天。每组应有足够的雌鼠和雄鼠配对，产生约20只受孕雌鼠。为此，一般在试验开始时两种性别每组各需要30只（F0）；在继续的试验中用来交配的动物每种性别每组需要25只（至少每窝雌雄各取1只、最多每窝雌雄各取2只）。选用的亲代雌鼠应为非经产鼠、非孕鼠。
 
    4 剂量及分组
至少设3个剂量的受试物组和一个对照组。健康的动物随机分为处理组和对照组，试验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的±20％。某些受试物的高剂量组设计应考虑其对营养素平衡的影响，对于非营养成分受试物剂量不应超过饲料的5％。其剂量设计可选最大耐受剂量或有胚胎毒性的剂量作为高剂量，低剂量组对亲代动物应不产生全身毒性或繁殖毒性（可按最大未观察到有害作用剂量的1/30或可能摄入量的100倍）。同时设对照组，对照组的饲养和处理方式与受试物组相同，根据情况，对照组可以是未处理对照、假处理对照，如果给予受试物时使用某种介质，则应设介质对照。如果受试物通过加入饲料的方式给予并引起食物摄入量和利用率的降低，需要考虑使用配对饲养的对照组。
 
    5 操作步骤
5.1 受试物配制
一般用蒸馏水作溶剂，如受试物不溶于水，可用食用油、医用淀粉、羧甲基纤维素等配成乳化液或悬浮液。受试物应于灌胃前新鲜配制，除非有资料表明以溶液（或悬浊液、乳浊液等）保存具有稳定性。同时应考虑使用的介质可能对受试物的吸收、分布、代谢或潴留的影响；对理化性质的影响及由此而引起的毒性特征的影响；对摄食量或饮水量或动物营养状况的影响。
5.2 实验动物的处理：
5.2.1 受试物的给予方式：经口给予，可加入饲料、饮水中或灌胃。如果受试物是灌胃给予，应每周称体重2次，根据体重计算给予受试物的体积。
5.2.2 亲代和子代接受的受试物剂量（按动物体重给予，mg/kgBW或g/kgBW）、饲料和饮水相同。F1代的雌鼠和雄鼠在断乳后每日给予。两种性别的大鼠（亲代和F1代）在交配前应每日给予受试物至少连续10周，并继续给予受试物至试验结束。
5.2.3 给予受试物方案：试验期间，所有动物应采用相同的方式给予受试物；连续给予受试物，每周7天。
5.3 交配：
每次交配时，每只雌鼠应与从同一剂量组随机选择的单个雄鼠同笼（1：1交配），直到检测到阴栓，或者经过3个发情期或两周。查到阴栓后应尽快将雌、雄鼠分开，如果经过3个发情期或两周还未进行交配，也应将雌雄鼠分开，不再继续同笼。配对同笼的雌雄鼠应作标记。所有雌鼠在交配期应每天检查精子或阴栓，直到证明已交配为止。查到阴栓的当天为受孕0天。预计已怀孕的雌鼠应分开放入繁殖笼中，孕鼠临产时应提供筑巢的垫料。
5.4 每窝仔鼠数量的标准化：将每窝仔鼠于出生后第4天调整至相同数量（一般每窝8-10只，不应少于8只），尽量做到每窝内雌、雄数量相等，也可以窝内雌、雄数量不等，但各窝之间两性别的鼠数应分别相同。原窝中多余的鼠应随机抽出，而不应按体重选择。
5.5 观察代数：观察代数随受检目的而异，可作一代、二代、三代或多代观察。如果在两代繁殖试验中观察到受试物对子代有明显的生殖、形态或毒性作用，则需要进行第3代繁殖试验，确定受试物的蓄积作用。
5.6 一代、二代和三代繁殖试验法
5.6.1 一代繁殖试验法
 
5.6.2 两代繁殖试验法
5.6.2.1 两代繁殖试验示意图
  
5.6.2.2 亲代F0 断乳后，喂含受试物饲料三个月，雌－雄即可交配，所产仔鼠为Flao Fla 断乳后饲以不含受试物的基础饲料，观察三个月。
5.6.2.3  Fla 断乳后10天将F0 再次交配，所产仔鼠为Flb，将20只孕鼠（F0）中，5只产前2-3天剖腹检查胎鼠有无畸形；另5只自然分娩观察产后仔鼠情况；作10只孕鼠自然分娩，所产仔鼠Flb 继续繁殖。
5.6.2.4 Flb 断乳后喂含受试物饲料三个月，进行交配，所产仔鼠F2a 在断乳后喂不含受试物的饲料，观察三个月。
5.6.2.5 仔鼠F2a 断乳后10天 与Flb 再次交配，产F2b 前将 Flb 孕鼠分两群，每群10只，同6.5.2.3 。
5.6.3 三代繁殖试验法
5.7 进行亲代、一代、二代、三代繁殖试验可参考6.5.2.2，6.5.2.3 进行。
5.8 可根据情况繁殖两窝以上。

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