1 范围
本方法规定了急性毒性试验的基本技术要求。
本方法适用于评价保健食品的急性毒性作用。
2 术语和定义
下列术语和定义适用于本方法。
2.1 LD50：半数致死量（median lethal dose,LD50）是经口给予受试物后，预期能够引起动物死亡率为50％的单一受试物剂量，该剂量为经过统计得出的估计值。其单位是每公斤体重所摄入受试物质的毫克数、克数或毫升数，即mg/kgBW、g/kgBW或ml/kgBW。
2.2 最大耐受剂量法（Test of Maximum Tolerated Dose）：用最大使用浓度和最大灌胃容量给予20只动物后，连续观察7－14天，未见任何动物死亡，则MTD大于╳╳ g/kgBW 。
3 原理
经口一次性给予或24h内多次给予受试物后，在短时间内观察动物所产生的毒性反应，包括致死的和非致死的指标参数，致死剂量通常用半数致死剂量LD50来表示。
4 实验动物
一般均分别用两种性别的成年小鼠或/和大鼠。小鼠体重为18～22g，大鼠体重为180～220g。如对受试物的毒性已有所了解，还应选择对其敏感的动物进行试验，如对黄曲霉素选择雏鸭，对氰化物选择鸟类。动物购买后适应环境3－5天。
5 操作步骤
5.1 受试物的处理：
受试物应溶解或悬浮于适宜的介质中。一般采用水或食用植物油作溶剂，可以考虑用羧甲基纤维素、明胶、淀粉等配成混悬液；不能配制成混悬液时，可配制成其它形式（如糊状物等）。必要时可采用二甲基亚砜。但不能采用具有明显毒性的有机化学溶剂。如采用有毒性的溶剂应单设溶剂对照组观察。
5.2 受试物的给予
5.2.1 途径：经口。
5.2.2 试验前空腹：动物应隔夜空腹（一般禁食16 h左右，不限制饮水）。
5.2.3 容量：各剂量组的灌胃容量相同（ml/kgBW），小鼠常用容量为0.4 ml/20gBW；大鼠常用容量为2.0ml/200gBW。
5.2.4 方式：一般一次性给予受试物。也可一日内多次给予（每次间隔4～6 h ，24 h内不超过3次，尽可能达到最大剂量，合并作为一次剂量计算）。
5.3 几种常用的急性毒性试验设计方法
5.3.1 霍恩氏（Horn）法
5.3.1.1 预试验：可根据受试物的性质和已知资料，选用下述方法：一般多采用0.1、1.0
和10.0 g/kgBW 的剂量，各以2～3只动物预试。根据24h内死亡情况，估计LD50的可能范围，确定正式试验的剂量组。也可简单地采用一个剂量，如215 mg/kgBW，用5只动物预试。观察2h 内动物的中毒表现。如症状严重，估计多数动物可能死亡，即可采用低于215 mg/kgBW的剂量系列，反之症状较轻，则可采用高于此剂量的剂量系列。如有相应的文献资料时可不进行预试。
5.3.1.2 动物数：一般每组用5只。
5.3.1.3 常用剂量系列：
1.0
2.15 ×10t t=0，±1， ±2，±3
4.64
因为剂量间距较 t=0，±1， ±2，±3为小，所以结果较为精确。一般试验时，可根据上述剂量系列设计5个组，即较原来的方法在最低剂量组以下或最高剂量组以上各增设一组，这样在查表时容易得出结果。
5.3.1.4 正式试验：将动物在实验动物房饲养观察3～5天，使其适应环境，证明其确系健康动物后，进行随机分组。给予受试物后一般观察7或14天，若给予后的第4天继续有死亡时，需观察14天，必要时延长到28天。记录死亡数，查表求得LD50，并记录死亡时间及中毒表现等。
5.3.1.5 该方法的优缺点：优点是简单易行，节省动物；缺点是所得LD50的可信限范围较大，不够精确。但经多年来的实际应用与验证，同一受试物与寇氏法所得结果极为相近。因此对其测定的结果应认为是可信与有效的。
5.3.2 寇氏（Korbor）法
5.3.2.1 预试验：除另有要求外，一般应在预试中求得动物全死亡或90％ 以上死亡的剂量和动物不死亡或10％ 以下死亡的剂量，分别作为正式试验的最高与最低剂量。
5.3.2.2 动物数：除另有要求外，一般设5～10个剂量组，每组6～10只动物为宜。
5.3.2.3 剂量：将由预试验得出的最高、最低剂量换算为常用对数，然后将最高、最低剂量的对数差，按所需要的组数，分为几个对数等距（或不等距）的剂量组。
5.3.2.4 试验结果的计算与统计
5.3.2.4.1 列试验数据及其计算表
包括各组剂量（mg/kgBW，g/kgBW），剂量对数（X），动物数（n），动物死亡数（r），动物死亡百分比（P，以小数表示），以及统计公式中要求的其它计算数据项目。
5.3.2.4.2 LD50的计算公式
根据试验条件及试验结果，可分别选用下列三个公式中的一个，求出 logLD50，再查其自然数，即LD50（mg/kgBW，g/kgBW）。
5.3.2.4.2.1 按本试验设计得出的任何结果，均可用式（1）：
式中：Xi 与Xi+1 及Pi+1与Pi ---分别为相邻两组的剂量对数以及动物死亡百分比。
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