1 适用范围
本方法规定了人参含片、人参冲剂、人参茶、人参胶囊等以人参为主要原料的保健食品中人参皂甙的含量的HPLC的测定方法。
本方法适用于人参含片、人参冲剂、人参茶、人参胶囊等以人参为主要原料的保健食品中人参皂甙的含量的HPLC的测定方法。
本方法的六种皂甙的最低检出量为：10mg/kg。
本方法的六种皂甙的最佳线性范围：0.1mg/mL～1mg/mL。
2 原理
将试样中的人参皂甙溶解、提取、经净化处理后，使用梯度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器（UV）检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标定量，适用于保健食品中人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的同时定量分析。
3 试剂
试验用水为去离子水。
3.1乙腈：色谱纯，200nm吸光度值为0.021。
3.2甲醇：分析纯。
3.3101大孔吸附树脂。
3.4高效液相色谱流动相：梯度淋洗A液为乙腈，B液为水。
3.5人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准品：含量大于98％（HPLC）。
3.6人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准溶液的配制：配制人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准储备液，浓度分别为10mg/mL；再以此储备液配制成混合标准系列溶液，浓度范围为0.1mg/mL～1mg/mL；所有标准溶液均用甲醇配制。
4 仪器设备
4.1高效液相色谱仪：双高压输液泵，附紫外检测器。
4.2超声波清洗器。
4.3离心机。
4.4水浴锅。
5 分析步骤
5.1固体试样处理取片剂或胶囊内容物研成粉末，并过20目筛；精确称取该粉末样适量于50mL具塞试管中，加水50mL于超声波清洗器中超声提取30min，取出，待溶液恢复常温后，准确取出10mL，通过D-101大孔吸附树脂净化柱（大孔吸附树脂使用前先经甲醇浸泡，水洗，装成10cm长小柱），小柱先用10mL水冲洗，弃去水液之后，用70％甲醇25mL洗脱皂甙，收集甲醇溶液，水浴上蒸干，残留以甲醇溶解并定容至5mL，该样液离心后过0.5µm膜，滤液进行色谱分析。
5.2液体试样处理取一定量的试样于水浴上蒸干，残留以50mL水超声提取30min，余下步骤与5（1）相同。
5.3测定
5.3.1液相色谱参考条件
5.3.1.1色谱柱：反相C18柱，4.6×250mm, 5µm
5.3.1.2紫外检测器：检测波长203nm
5.3.1.3梯度淋洗条件：
时间（min） 乙腈（％） 水（％）流速/min） 梯度曲线
0 16 84 1.0 1
20 18 82 1.0 6
55 40 60 1.0 6
65 40 60 1.0 6
75 100 0 1.0 1
80 16 84 1.0 1
d柱温：35℃
5.3.2色谱分析
5.3.2.1标准曲线的制备将混合标准系列溶液均取5 µL进行HPLC分析，用峰面积对浓度作各皂甙的标准回归曲线。
5.3.2.2试样测定取5 µL试样净化液进行高效液相色谱分析，以绝对保留时间定性，用峰面积通过各皂甙的标准曲线定量计算试样中人参皂甙 Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的含量。
6 分析结果表述
6.1计算
C×5×5×100
试样中各人参皂甙的含量（g/100g）=———————
m×1000
式中：
C－试样溶液中各人参皂甙的含量，mg/mL；
m－试样质量，g；
试样中总人参皂甙的含量（g/100g）＝CRe+CRg1+CRb1+CRc+CRb2+CRd
式中：CRe（g/100g）：试样中Re的含量
CRg1（g/100g）：试样中Rg1的含量
CRb1（g/100g）：试样中Rb1的含量
CRc（g/100g）：试样中Rc的含量
CRb2 （g/100g）：试样中Rb2的含量
CRd（g/100g）：试样中Rd的含量
6.2结果表示：
计算结果保留三位有效数字。 |
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