1 范围
本方法规定了以褪黑素为功效成分的胶囊或片剂包装的保健食品中褪黑素的测定方法。
本方法适用于以褪黑素为功效成分的胶囊或片剂包装的保健食品中褪黑素的含量测定。
本方法高效液相色谱－紫外检测法的检出限为0.5mg;取样量0.5g时，检出浓度为0.07mg/kg.本方法高效液相色谱－荧光法的检出限为30pg，线性范围为0.05～0.50ng。

    2 原理
试样中的褪黑素经溶解、稀释、过滤后，使用具有紫外检测器的高效液相色谱仪检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
（高效液相色谱－紫外检测法）
1 试剂
除非另有说明，在分析中仅使用确定为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。
（1） 甲醇：色谱纯。
（2） 无水乙醇：优级纯。
（3） 三氟乙酸：优级纯。
（4） 高效液相色谱流动相：甲醇：水：三氟乙酸＝45：55：0.05
（5） 褪黑素（Melatonin）标准品：Sigma公司产品。
（6） 褪黑素标准溶液的配制
精确称量30mg褪黑素标准品于100mL容量瓶中，加入70％乙醇溶解后定容至刻度。准确吸取2mL上述溶液于10mL容量瓶中，加入流动相（4）定容至刻度，此溶液浓度为0.060mg/mL。
2 仪器
（1） 高效液相色谱仪：附紫外检测器。
（2） 超声波清洗器。
（3） 离心机。

    3 分析步骤
（1） 试样处理：使用研钵将胶囊研成粉末并使之混合均匀。
（2） 精确称量约一粒胶囊的重量于10mL容量瓶中，以70％乙醇定容至刻度，使用超声波清洗器提取10min。将提取液离心至澄清。准确量取上清液2mL于10mL容量瓶中，以流动相定容至刻度，混匀后经0.45µm滤膜过滤后进行色谱分析。
（3） 测定
3.1 液相色谱参考条件
3.1.1 色谱柱：C18,  4.6mm×250mm。
3.1.2 紫外检测器：检测波长：222nm。
3.1.3 流速：0.8mL/min。
3.1.4 柱温：室温
3.2 色谱分析
量取10µL标准溶液及试样净化液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。

    4 分析结果的表述
（1）计算
    h          10
    —×c×10×—×1000
    hs         2
X＝—————————
         M
式中：
X-试样中褪黑素的含量，mg/kg；
h-试样的峰高或峰面积；
hs-标准的峰高或峰面积；
c-褪黑素标准溶液的浓度，mg/mL；
m-试样质量，g。
（2）结果表示：计算结果保留二位有效数字。

    5 技术参数
准确度：本方法的回收率在92.7%～102.6%之间。
精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5％。